[Real Time PCR]#22 COVID-19 증폭 실험

김민지
2022-03-21
조회수 545

목차

1.개요 및 목적

2. 실험 재료 및 기기

3. 실험 방법 및 절차

4. 실험 결과

5. 주의 사항


1. 개요 및 목적

2019년 중국 우한에서 시작으로 중국과 전 세계적으로 확산된 호흡기 감염질환인 COVID-19는, 감염자로부터 나오는 비말이 호흡기 또는 눈, 코, 입을 통해 전염이 된다.  COVID의 유전자는 ORD8, N, E, RdRp등으로 다양하지만, 이 실험에서는 GeneProof사의 SARS-CoV-2 Advanced PCR Kit를 사용해 RdRp, E. N 유전자를 증폭하는 실험이며, DNA가 아닌 RNA를 증폭하는 실험이다.


2. 실험 재료 및 기기

실험재료

- GeneProof SARS-CoV-2 Advanced PCR Kit, COVID-19 RNA, dH20


실험기기

- Real Time PCR System (ex. QuantStudio5 - ABI, Thermo Fisher Scientific, USA)


3. 실험 방법 및 절차

① COVID 표준물질 RNA를 10배씩 희석한다.


Sample 1
(104 copies/uL)
Sample 2
(103 copies/uL)
Sample 3
(102 copies/uL)
Sample 4
(101 copies/uL)
Sample 5
(100 copies/uL)
RNA10RNA 2 uLSample 1
2 uL
Sample 2
2 uL
Sample 3
2 uL
Sample 4
2 uL
dH2O18 uL18 uL18 uL18 uL18 uL
Total20 uL20 uL20 uL20 uL20 uL


② PCR 샘플 시약 조성


Sample 1~5N.C.
Master Mix*15 uL15 uL
RNA10 uL-
dH2O-10 uL
Total25 uL25 uL

* Master Mix에 Primer와 Probe가 포함되어 있다.


4. 실험 결과와 결과의 해석

- Sample 1 (104 copies/uL) 그래프                                 - Sample 2 (103 copies/ uL) 그래프

- Sample 3 (102 copies/uL)                                           - Sample 4 (101 copies/ uL)


- Sample 5 (100 copies/ uL)

- N.C.

-결과 해석

  • RdRp gene은 FAM 형광에서 증폭하는 것을 확인했고, E gene 과 N gene은 CY5 형광에서 증폭을 확인이 되었다.
  • IC는 HEX에서 확인을 할 수 있는데, IC는 The human RNase P gene을 target으로 보는데 이 실험에서는 dH2O를 N.C. 샘플로 사용을 했기 때문에 증폭을 하지 않았다. 
  • *음성검체를 사용 할 경우, 밑에 그래프와 같은 결과를 확인 할 수 있다.



5. 주의 사항

① Real time PCR 할 때, multi PCR이여서 target이 여러개 이므로 각 타겟에 맞는 형광을 선택한다.

② RNA 희석할 때, 파이펫으로 정확한 양을 희석할 수 있도록 주의한다.

③ 시약의 유효기간을 확인한 뒤 실험을 한다.

④ 실험 시 오염에 주의하며 진행한다.



* 본 실험에 사용 된 Kit는 GeneProof의 GeneProof SARS-CoV-2 Advanced PCR Kit를 사용했습니다.



김민지

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