[PCR]아가로스 겔(agarose gel) 전기영동법

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1. 개요 및 목적

(내용시작!)

아가로스 겔을 이용한 전기영동법이며, 직류 정전압 전류를 통함으로 목적물질을 분리한다. DNA의 sugar-phosphate backbone는 강한 음전하를 가지고있기 때문에 전류가 가해지면 음전하에서 양극으로 이동해 크기별로 구별된다. 아가로스 겔 전기영동법 실험을 통해 DNA의 크기를 알 수있다.

아가로스 겔 전기영동 실험 시 DNA 이동에 영향 주는 요인들

1. DNA크기에 따라 이동시간이 다르다.

- DNA 분자의 크기가 작으면 빠르게 이동하고, 크면 느리게 이동한다.

2. 아가로스 겔의 농도가 높으면 느르게 이동하며 낮을수록 빠르게 이동한다.

3. 아가로스 겔의 농도가 높으면 작은 사이즈의 밴드를 분리하는 데 효율적이고, 겔의 농도가 낮으면 큰 사이즈의 밴드를 분리하는 데 도움이 된다. 

4. 전앞이 높을수록 이동속도가 빨라진다.

2.실험 재료 및 기기

2. 실험 재료 및 기기

(내용시작!) 

아가로스 겔(agarose gel, 0.5X TBE buffer, 젤 이미지 처리 장치, 피펫

3. 실험 방법 및 절차

3. 실험 방법 및 절차

(내용시작!)

① PCR이 끝난 product에 6X loading dye를 넣는다. (ex, product가 20ul일 경우, 4ul의 6X loading dye를 넣고 섞어준다.)

② 0.5X TBE buffer가 담겨있는 gel running tank에 아가로스 겔을 위치한다. (gel이 충분히 잠길정도의 TBE buffer가 필요하며, 홈에 기포가 생기지 않도록 주의한다.)

 Note: product를 loading 할 때, 1 well에 1 product를 loading 하고 gel이 뚤리거나 찢어지지 않도록 주의한다.

③ gel의 왼쪽부터 차례대로 loading 한다. 맨 왼쪽에는 ladder를 loading하기 위해 비워둔다.

④ 전기영동의 장치의 power supply를 연결 후 250 V 전압으로 30분간 run한다. 밴드가 덜 전개 되었을 경우, gel을 조금 더 running한다.

⑤ 전기영동 결과를 볼 수있는 gel 이미지 처리장치를 이용해 이미지를 촬영한다.

4. 실험 결과

4. 실험 결과

(내용시작!)

gel 이미지 처리장치를 이용해 촬영한 이미지를 왼쪽 표를보고 분석한다.

5. 주의 사항

5. 주의 사항

(내용시작!)

전기영동을 할 때, 너무 오래 진행되면 ladder와 product들이 다 빠져나갈 수 있으므로 주의한다.

6. 관련 자료

6. 관련 자료

(내용시작!)

김민지

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